分析類(lèi)型
親和性、動(dòng)力學(xué)、濃度檢測(cè)、有效濃度檢測(cè)、熱動(dòng)力學(xué)、結(jié)合計(jì)量、結(jié)合條件、相互作用機(jī)制、常規(guī)篩選、配體垂釣、表位測(cè)定、環(huán)境因素依賴(lài)性
應(yīng)用類(lèi)型
結(jié)合特異性、抗體選擇、藥物發(fā)明、配體垂釣、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、基因調(diào)控、親和層析、結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系、小分子間相互作用
生物傳感器和微射流系統(tǒng)
SensiQ的SPR生物傳感器運(yùn)用了Texas Instruments公司研發(fā)的光學(xué)傳感器設(shè)計(jì),以及Kretschmann SPR幾何學(xué)構(gòu)建,靈敏度高,光學(xué)靜穩(wěn)。生物傳感器***次性使用,其羧基化表面適合于多種優(yōu)化鍵合方案。生物傳感器的安裝快捷,幾秒鐘便可完成,使用也非常簡(jiǎn)便。功能化的生物傳感器即便在儲(chǔ)存***段時(shí)間后仍可繼續(xù)使用。
SensiQ的雙通道nL數(shù)量***的流動(dòng)池設(shè)計(jì),利于實(shí)時(shí)的參照曲線減除,并保證分析物在生物傳感器的相互作用表面具有高傳質(zhì)性(Mass Transport)。***大地降低死體積和樣品散射,對(duì)于真實(shí)的和量化的動(dòng)力學(xué)和親和性數(shù)據(jù)的獲取至關(guān)重要。耐用的射流設(shè)計(jì)便于維修,明顯減少了停機(jī)時(shí)間。
表面等離子共振技術(shù)
表面等離子共振(SPR)是***種光學(xué)現(xiàn)象,可被用來(lái)實(shí)時(shí)跟蹤在天然狀態(tài)下生物分子間的相互作用。這種方法對(duì)生物分子無(wú)任何損傷,且不需任何標(biāo)記物。
先將***種生物分子(靶分子)鍵合在生物傳感器表面,再將含有另***種能與靶分子產(chǎn)生相互作用的生物分子(分析物)的溶液注入并流經(jīng)生物傳感器表面。生物分子間的結(jié)合引起生物傳感器表面質(zhì)量的增加,導(dǎo)致折射指數(shù)按同樣的比例增強(qiáng),生物分子間反應(yīng)的變化即被觀察到。這種反應(yīng)用反應(yīng)單位(RU)來(lái)衡量:1 RU = 1pg 蛋白/mm2 = 1 x 10-6 RIU(折射指數(shù)單位)。
分析物在被注入的過(guò)程中,由對(duì)流和擴(kuò)散流經(jīng)相互作用表面而與靶分子形成復(fù)合物,導(dǎo)致分析物濃度改變。微射流系統(tǒng)內(nèi)nL數(shù)量***流動(dòng)池的應(yīng)用,使得這種濃度的改變降至***低點(diǎn),以確保高傳質(zhì)系數(shù)(Mass Transport Coefficient,km)。為保證分析物的傳質(zhì)性不被限制,鍵合在生物傳感器表面的靶分子濃度必須較低。當(dāng)分析物被注入時(shí),分析物-靶分子復(fù)合物在生物傳感器表面形成,導(dǎo)致反應(yīng)增強(qiáng)。而當(dāng)分析物被注入完畢后,分析物-靶分子復(fù)合物解離,導(dǎo)致反應(yīng)減弱。通過(guò)結(jié)合式相互作用模型擬合這種反應(yīng)曲線,動(dòng)力學(xué)常數(shù)便可被確定。而非特異性結(jié)合和總折射指數(shù)移相等效應(yīng)則可通過(guò)參照曲線減除法予以驅(qū)除。
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親和分子對(duì)
蛋白質(zhì)–蛋白質(zhì)、多肽–受體、抗體–抗原、膜受體–配體、凝集素–聚糖/糖蛋白、蛋白質(zhì)–小分子、蛋白質(zhì)–核酸、細(xì)胞–配體等
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
任何***對(duì)親和分子,***個(gè)(靶分子)被鍵合在生物傳感器表面,另***個(gè)(分析物)被置于溶液中。當(dāng)含有分析物的溶液流經(jīng)靶分子鍵合的生物傳感器表面時(shí),親和性復(fù)合物生成。
SensiQ配備雙通道流動(dòng)注射分析式微射流系統(tǒng),內(nèi)有85nL流動(dòng)池。SensiQ使用***次性的SPR生物傳感器,裝卸簡(jiǎn)便。生物傳感器表面包被有單層的羧基化寡聚環(huán)氧乙烷(Carboxylated Oligoethyleneoxide)基質(zhì),可鍵合多種生物分子,并有效地阻止非特異性結(jié)合及變性。靶生物分子的這種既被鍵合在固相生物傳感器表面,又存在于液相中的方式,增進(jìn)了兩種親和分子間的接觸性,同時(shí)避免了由于人為因素所造成的動(dòng)力學(xué)分析的復(fù)雜化。
SensiQ備有多種鍵合方案用于改進(jìn)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),以支持生物分子的附著。***常用的偶聯(lián)方式是用EDC/NHS進(jìn)行胺偶聯(lián)。其它鍵合方式,例如順丁烯二酰亞胺-硫醇(Maleimide-thiol),還原胺化,酰肼-醛(Hydrazide-aldehyde),親和力捕獲等,亦可使用。SensiQ雙通道檢測(cè)中的***個(gè)通道可用于生成適當(dāng)?shù)膮⒄涨€。當(dāng)表面化學(xué)物固定好以后,加入***多250 μl的樣品,緩沖液流經(jīng)生物傳感器表面時(shí)產(chǎn)生穩(wěn)定的基線。樣品注入和計(jì)時(shí)通過(guò)自動(dòng)化控制完成。通過(guò)實(shí)驗(yàn)設(shè)置向?qū)Чδ埽脩艨捎涗浂啻巫⑸渲芷冢⒕邆涓咧貜?fù)性。
控制軟件
SensiQ的控制軟件在原始反應(yīng)曲線生成時(shí),同時(shí)并實(shí)時(shí)獲取和展示兩個(gè)通道內(nèi)的數(shù)據(jù)。參照通道內(nèi)的數(shù)據(jù)被減除,以補(bǔ)償熱漂移、非特異性結(jié)合、總折射指數(shù)移相等效應(yīng),從而得到清晰高質(zhì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。控制軟件在反應(yīng)曲線上簡(jiǎn)單加入報(bào)告點(diǎn),用來(lái)確定樣品注入后產(chǎn)生的結(jié)合反應(yīng)。報(bào)告點(diǎn)的添加可在實(shí)驗(yàn)中的任何時(shí)候由人工進(jìn)行,或由程序預(yù)設(shè)在固定的實(shí)驗(yàn)周期之中。列于表格中的所有報(bào)告點(diǎn),連同相關(guān)的事件紀(jì)錄,均有案可查。數(shù)據(jù)文件被儲(chǔ)存后可被控制軟件重新打開(kāi)并編輯。
SensiQ控制軟件的簡(jiǎn)單明了的用戶界面,使得實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和進(jìn)行高效省時(shí)。實(shí)驗(yàn)向?qū)Чδ芎?jiǎn)化設(shè)置過(guò)程,提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。
QDATTM分析軟件
反應(yīng)曲線的分析以及其后的動(dòng)力學(xué)和親和性數(shù)據(jù)測(cè)算通常繁瑣費(fèi)時(shí)。SensiQ的QDATTM分析軟件極大地簡(jiǎn)化了數(shù)據(jù)分析過(guò)程,為研究人員的動(dòng)力學(xué)和親和性測(cè)定提供了簡(jiǎn)單、省時(shí)、可信的手段。
QDATTM是在Biologic Software公司應(yīng)用廣泛的Clamp and Scrubber架構(gòu)之上開(kāi)發(fā)的***新***代分析軟件,可在幾分鐘內(nèi)成功分析采集到的高質(zhì)量數(shù)據(jù)。QDATTM的簡(jiǎn)明友好界面帶領(lǐng)用戶通過(guò)***系列步驟,幾秒鐘內(nèi)便完成信息的測(cè)算。QDATTM的模型擬合運(yùn)用數(shù)字整合及優(yōu)化的曲線擬合算法,迅速地估算***佳擬合參數(shù)值,確保相互作用模型和數(shù)據(jù)集的擬合,以測(cè)定動(dòng)力學(xué)和親和性常數(shù),以及濃度分析。QDATTM同時(shí)提供了簡(jiǎn)單殘差圖和殘差標(biāo)準(zhǔn)差,用來(lái)定量評(píng)估擬合的程度。QDATTM的動(dòng)力學(xué)擬合模型包括準(zhǔn)******結(jié)合模型(Pseudo-first-order Binding Model)和準(zhǔn)******傳質(zhì)結(jié)合模型(Pseudo-first-order Binding Model with Mass Transport)。